In vitro Zytotoxizitätstest: Elutionstest (Mauszelllinie L929)
Kontaktieren Sie unsBei dieser In-vitro-Methode wird das zytotoxische Potenzial des Prüfgegenstandes mikroskopisch gemäß USP 41, Kapitel <87> untersucht.
Vorgesäte Zellen werden mit einem Extrakt des Prüfstoffs kultiviert und anschließend wird die biologische Reaktivität der Zellen nach einer Behandlungsdauer von 48 Stunden untersucht.
Bewertung der Wachstumshemmung von Zellen durch Extraktionsverfahren und mikroskopische Auswertung
- Der Prüfgegenstand wird 24 Stunden lang unter Rühren in MEM, ergänzt mit 10 % FBS, bei 37 ± 1 °C extrahiert.
- Am Ende der Inkubationszeit werden die Zellen mikroskopisch auf morphologische Veränderungen untersucht. Die biologische Reaktivität (zelluläre Degeneration und Missbildung) wird beschrieben und auf einer Skala von 0 bis 4 bewertet (siehe Tabelle). Die Reaktionen der mit dem Extrakt des Prüfgegenstandes behandelten Zellkulturen und der Kontrollen werden ausgewertet.
- Der Prüfgegenstand erfüllt die Anforderungen der Prüfung, wenn die Reaktion auf den Prüfgegenstandsextrakt nicht größer als Grad 2 (leicht reaktiv) ist.
Klasse |
Reaktivität |
Bedingungen für alle Kulturen |
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0 |
Keine |
Diskrete intrazytoplasmatische Granula; keine Zelllyse |
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1 |
Leichte |
Nicht mehr als 20 % der Zellen sind rund, lose anhaftend und ohne intrazytoplasmatische Granula; gelegentlich sind lysierte Zellen vorhanden |
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2 |
Mild |
Nicht mehr als 50 % der Zellen sind rund und weisen keine intrazytoplasmatischen Granula auf; keine ausgedehnte Zelllyse und leere Bereiche zwischen den Zellen |
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3 |
Mäßig |
Nicht mehr als 70 % der Zellschichten enthalten abgerundete Zellen oder sind lysiert |
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4 |
Schwere |
Nahezu vollständige Zerstörung der Zellschichten |
Protokoll |
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Zelllinie |
L929-Zellen (ATCC Nr. CCL1, NCTC-Klon 929 (Bindegewebsmaus), Klon von Stamm L (DSMZ)) |
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Analyse |
Mikroskopische Auswertung |
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Extraktionszeit |
24 h |
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Inkubationszeit |
48 h |
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Qualitätskontrollen |
Lösungsmittelkontrolle: MEM 10% FBS Negativkontrolle: Polyethylen hoher Dichte (HDPE) Positive Kontrolle: 0,1% Zink-Diethyldithiocarbamat (ZDEC), 0,25% Zink-Dibutyldithiocarbamat (ZDBC) |
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Lieferung von Daten |
Biologische Reaktivität des Testmaterials gemäß USP 41, Kapitel <87> |
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Positive Vorhersage |
Die Testaufgabe erfüllt die Anforderungen des Tests, wenn die Reaktion auf den Testaufgabenextrakt nicht größer als Grad 2 (leicht reaktiv) ist |
Referenzen
- Guess, W.L.; Autian, J. (1966). Toxicity Evaluation of Lexan, Kyonar, Rilsan, Short-Term Studies. Journal of Oral Therapeutics and Pharmacology Vol 3, No.2, pp 116 – 123
- United States Pharmacopeia and National Formulary (USP 41), Chapter <87> (2018). Biological Reactivity Tests, in vitro - Elution Test
