In vitro Zytotoxizitätstest: Agar-Diffusionstest (Mauszelllinie L929)
Kontaktieren Sie unsBeim Agar-Diffusionstest wird das Prüfmaterial nach Diffusion durch eine Agaroseschicht auf seine auslaugbaren zytotoxischen Inhaltsstoffe untersucht.
Das Testsystem wird verwendet, um das Eindringen von aus dem Prüfgegenstand freigesetzten auswaschbaren Substanzen in das Gewebe des Patienten durch eine Barriere (z. B. die Haut) zu simulieren. Dieser Test ist anwendbar, wenn diese auslaugbaren Substanzen durch die Agaroseschicht diffundieren können, aber nicht mit ihr reagieren.
Da die Agaroseschicht mit Neutralrot angefärbt ist, wird das zytotoxische Potenzial des Prüfmaterials durch die Einstufung der Entfärbungsfläche und die Bewertung der Zelllyse der Zellkultur bestimmt.
Bewertung der Zytotoxizität durch mikroskopische Auswertung nach indirektem Zellkontakt
- Die subkonfluente Zellmonolage wird mit einer Agaroseschicht bedeckt und mit Neutralrot angefärbt.
- Die Prüfsubstanz oder ein Extrakt der Prüfsubstanz wird auf die Agaroseschicht in indirektem Kontakt mit den Zellen aufgetragen.
- Die Zytotoxizität wird nach einer Inkubationszeit von 24 h mikroskopisch bestimmt. Dazu werden der Entfärbungsindex und der Lyse-Index qualitativ bestimmt (siehe Tabelle).
Protokoll |
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Zelllinie |
L929-Zellen (ATCC Nr. CCL1, NCTC-Klon 929 (Bindegewebsmaus), Klon von Stamm L (DSMZ)) |
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Analyse |
Mikroskopische Auswertung |
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Inkubationszeit |
24 h bei 37 ± 1°C |
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Qualitätskontrollen |
Lösungsmittel-Kontrolle: DMEM 10% FBS Negativkontrolle: Hochdichtes Polyethylenmaterial Positivkontrolle: 0,1% Zink-Diethyldithiocarbamat (ZDEC) (Hatano Research Institute) |
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Lieferung von Daten |
Zytotoxizität nach Bewertungsskala |
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Positive Vorhersage |
Die Zellreaktion wird gemäß ISO 7405 oder ISO 10993-5 interpretiert. |
Referenzen
- ISO 7405: 2018, “Dentistry - Evaluation of biocompatibility of medical devices used in dentistry - Test procedures specific to dental materials“
- ISO 10993-5: 2009 “Tests for in vitro cytotoxicity”
